ಮಂಕಿಪಾಕ್ಸ್ ವೈರಸ್ ರಿಯಲ್ ಟೈಮ್ ಪಿಸಿಆರ್ ಕಿಟ್
ಉತ್ಪನ್ನ ವಿವರಗಳು
ಉದ್ದೇಶಿತ ಬಳಕೆ
ನೈಜ-ಸಮಯದ ಪಿಸಿಆರ್ ಸಿಸ್ಟಮ್‌ಗಳನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಮಾನವ ಸೀರಮ್ ಅಥವಾ ಲೆಸಿಯಾನ್ ಎಕ್ಸ್‌ಡೇಟ್ ಮಾದರಿಗಳಲ್ಲಿ ಮಂಕಿಪಾಕ್ಸ್ ವೈರಸ್ ಪತ್ತೆಗೆ ಇದನ್ನು ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ.
ಪರೀಕ್ಷಾ ತತ್ವ
ಈ ಉತ್ಪನ್ನವು ಫ್ಲೋರೊಸೆಂಟ್ ಪ್ರೋಬ್-ಆಧಾರಿತ Taqman® ನೈಜ-ಸಮಯದ PCR ವಿಶ್ಲೇಷಣೆ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯಾಗಿದೆ.ಮಂಕಿಪಾಕ್ಸ್ ವೈರಸ್‌ನ F3L ವಂಶವಾಹಿಯನ್ನು ಪತ್ತೆಹಚ್ಚಲು ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳು ಮತ್ತು ಪ್ರೋಬ್‌ಗಳನ್ನು ವಿನ್ಯಾಸಗೊಳಿಸಲಾಗಿದೆ.ಮಾನವ ಸಂರಕ್ಷಿತ ವಂಶವಾಹಿಯನ್ನು ಗುರಿಯಾಗಿಸುವ ಆಂತರಿಕ ನಿಯಂತ್ರಣವು ತಪ್ಪು-ಋಣಾತ್ಮಕ ಫಲಿತಾಂಶಗಳನ್ನು ತಪ್ಪಿಸಲು ಮಾದರಿ ಸಂಗ್ರಹಣೆ, ಮಾದರಿ ನಿರ್ವಹಣೆ ಮತ್ತು ನೈಜ-ಸಮಯದ PCR ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ಮೇಲ್ವಿಚಾರಣೆ ಮಾಡುತ್ತದೆ.ಕಿಟ್ ಸಂಪೂರ್ಣ ಪ್ರಿಮಿಕ್ಸ್ ಲೈಫೈಲೈಸ್ಡ್ ಸಿಸ್ಟಮ್ ಆಗಿದೆ, ಇದು ಮಂಕಿಪಾಕ್ಸ್ ವೈರಸ್ ಪತ್ತೆಗೆ ಅಗತ್ಯವಿರುವ ವಸ್ತುಗಳನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿದೆ: ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಸಿಡ್ ಆಂಪ್ಲಿಫಿಕೇಶನ್ ಕಿಣ್ವ, ಯುಡಿಜಿ ಕಿಣ್ವ, ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ಬಫರ್, ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಪ್ರೈಮರ್ ಮತ್ತು ಪ್ರೋಬ್.
ಮುಖ್ಯ ವಿಷಯಗಳು
ಒದಗಿಸಿದ ಘಟಕಗಳನ್ನು ಕೋಷ್ಟಕದಲ್ಲಿ ಪಟ್ಟಿ ಮಾಡಲಾಗಿದೆ.
| ಘಟಕಗಳು | ಪ್ಯಾಕೇಜ್ | ಪದಾರ್ಥ |
| ಮಂಕಿಪಾಕ್ಸ್ ವೈರಸ್ಲಿಯೋಫಿಲೈಸ್ಡ್ ಪ್ರಿಮಿಕ್ಸ್ | 8 ಸ್ಟ್ರಿಪ್ ಪಿಸಿಆರ್ ಟ್ಯೂಬ್ಗಳು× 6 ಚೀಲಗಳು | ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳು, ಪ್ರೋಬ್‌ಗಳು, dNTP/dUTP ಮಿಕ್ಸ್, Mg2+, Taq DNA ಪಾಲಿಮರೇಸ್, UDG ಕಿಣ್ವ |
| MPV ಧನಾತ್ಮಕ ನಿಯಂತ್ರಣ | 400 μL×1 ಟ್ಯೂಬ್ | ಗುರಿ ಜೀನ್ ಹೊಂದಿರುವ DNA ಅನುಕ್ರಮಗಳು |
| MPV ಋಣಾತ್ಮಕ ನಿಯಂತ್ರಣ | 400 μL×1 ಟ್ಯೂಬ್ | ಮಾನವ ಜೀನ್ ವಿಭಾಗವನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ DNA ಅನುಕ್ರಮಗಳು |
| ಕರಗಿಸುವ ಪರಿಹಾರ | 1 ಮಿಲಿ × 1 ಟ್ಯೂಬ್ | ಸ್ಟೆಬಿಲೈಸರ್ |
| ಅನುಸರಣೆಯ ಪ್ರಮಾಣಪತ್ರ | 1 ತುಣುಕು | / |
ಕಾರ್ಯಾಚರಣೆಯ ಹರಿವು
1. ಮಾದರಿಸಂಗ್ರಹಣೆ:ಅನುಸಾರವಾಗಿ ಸ್ಟೆರೈಲ್ ಟ್ಯೂಬ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಮಾದರಿಯನ್ನು ಸಂಗ್ರಹಿಸಬೇಕು
ಪ್ರಮಾಣಿತ ತಾಂತ್ರಿಕ ವಿಶೇಷಣಗಳೊಂದಿಗೆ.
2. ಕಾರಕ ತಯಾರಿ (ಕಾರಕ ತಯಾರಿ ಪ್ರದೇಶ)
ಕಿಟ್‌ನ ಘಟಕಗಳನ್ನು ಹೊರತೆಗೆಯಿರಿ, ಅವುಗಳನ್ನು ಸ್ಟ್ಯಾಂಡ್‌ಬೈ ಬಳಕೆಗಾಗಿ ಕೋಣೆಯ ಉಷ್ಣಾಂಶದಲ್ಲಿ ಸಮತೋಲನಗೊಳಿಸಿ.
3. ಮಾದರಿ ಸಂಸ್ಕರಣೆ (ಮಾದರಿ ಸಂಸ್ಕರಣಾ ಪ್ರದೇಶ)
3.1 ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಮ್ಲದ ಹೊರತೆಗೆಯುವಿಕೆ
ವೈರಲ್ DNA ಹೊರತೆಗೆಯುವ ಕಿಟ್‌ಗಳ ಅನುಗುಣವಾದ ಅಗತ್ಯತೆಗಳು ಮತ್ತು ಕಾರ್ಯವಿಧಾನಗಳ ಪ್ರಕಾರ, ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಮ್ಲದ ಹೊರತೆಗೆಯುವಿಕೆಗಾಗಿ 200μL ದ್ರವ ಮಾದರಿಗಳು, ಧನಾತ್ಮಕ ನಿಯಂತ್ರಣ ಮತ್ತು ಋಣಾತ್ಮಕ ನಿಯಂತ್ರಣವನ್ನು ತೆಗೆದುಕೊಳ್ಳಲು ಶಿಫಾರಸು ಮಾಡಲಾಗಿದೆ.
3.2 ಲೈಯೋಫಿಲೈಸ್ಡ್ ಪುಡಿ ಕರಗುವಿಕೆ ಮತ್ತು ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಸೇರ್ಪಡೆ
ಮಾದರಿಗಳ ಸಂಖ್ಯೆಗೆ ಅನುಗುಣವಾಗಿ ಮಂಕಿಪಾಕ್ಸ್ ವೈರಸ್ ಲಿಯೋಫಿಲೈಸ್ಡ್ ಪ್ರಿಮಿಕ್ಸ್ ಅನ್ನು ತಯಾರಿಸಿ.ಒಂದು ಮಾದರಿಗೆ ಲೈಯೋಫಿಲೈಸ್ಡ್ ಪ್ರಿಮಿಕ್ಸ್ ಪುಡಿಯನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ಒಂದು PCR ಟ್ಯೂಬ್ ಅಗತ್ಯವಿದೆ.ನಕಾರಾತ್ಮಕ ನಿಯಂತ್ರಣ ಮತ್ತು ಧನಾತ್ಮಕ ನಿಯಂತ್ರಣವನ್ನು ಎರಡು ಮಾದರಿಗಳಾಗಿ ಪರಿಗಣಿಸಬೇಕು.
(1) ಲೈಯೋಫಿಲೈಸ್ಡ್ ಪ್ರಿಮಿಕ್ಸ್ ಅನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ಪ್ರತಿ PCR ಟ್ಯೂಬ್‌ಗೆ 15μL ಕರಗುವ ಪರಿಹಾರವನ್ನು ಸೇರಿಸಿ, ನಂತರ ಪ್ರತಿ PCR ಟ್ಯೂಬ್‌ಗೆ ಕ್ರಮವಾಗಿ 5μL ಹೊರತೆಗೆಯಲಾದ ಮಾದರಿಗಳು / ನಕಾರಾತ್ಮಕ ನಿಯಂತ್ರಣ / ಧನಾತ್ಮಕ ನಿಯಂತ್ರಣವನ್ನು ಸೇರಿಸಿ.
(2) PCR ಟ್ಯೂಬ್‌ಗಳನ್ನು ಬಿಗಿಯಾಗಿ ಮುಚ್ಚಿ, ಲೈಯೋಫೈಲೈಸ್ಡ್ ಪೌಡರ್ ಸಂಪೂರ್ಣವಾಗಿ ಕರಗಿ ಮಿಶ್ರಣವಾಗುವವರೆಗೆ PCR ಟ್ಯೂಬ್‌ಗಳನ್ನು ಕೈಯಿಂದ ಫ್ಲಿಕ್ ಮಾಡಿ, ತ್ವರಿತ ಕಡಿಮೆ-ವೇಗದ ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿ ಮೂಲಕ PCR ಟ್ಯೂಬ್‌ಗಳ ಕೆಳಭಾಗಕ್ಕೆ ದ್ರವವನ್ನು ಸಂಗ್ರಹಿಸಿ.
(3) ಪತ್ತೆಗಾಗಿ ಸಾಮಾನ್ಯ ನೈಜ-ಸಮಯದ PCR ಉಪಕರಣವನ್ನು ಬಳಸಿದರೆ, ನಂತರ ನೇರವಾಗಿ ಪಿಸಿಆರ್ ಟ್ಯೂಬ್‌ಗಳನ್ನು ವರ್ಧನೆಯ ಪ್ರದೇಶಕ್ಕೆ ವರ್ಗಾಯಿಸಿ;ಪತ್ತೆಗಾಗಿ BTK-8 ಅನ್ನು ಬಳಸಿದರೆ, ನಂತರ ಈ ಕೆಳಗಿನ ಕಾರ್ಯಾಚರಣೆಗಳನ್ನು ನಿರ್ವಹಿಸಬೇಕಾಗುತ್ತದೆ: PCR ಟ್ಯೂಬ್‌ನಿಂದ BTK-8 ನ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ಚಿಪ್ ಬಾವಿಗೆ 10 μL ದ್ರವವನ್ನು ವರ್ಗಾಯಿಸಿ.ಒಂದು ಪಿಸಿಆರ್ ಟ್ಯೂಬ್ ಚಿಪ್‌ನಲ್ಲಿರುವ ಒಂದು ಬಾವಿಗೆ ಅನುರೂಪವಾಗಿದೆ.ಪೈಪ್ಟಿಂಗ್ ಕಾರ್ಯಾಚರಣೆಯ ಸಮಯದಲ್ಲಿ, ಪೈಪೆಟ್ 90 ಡಿಗ್ರಿ ಲಂಬವಾಗಿದೆ ಎಂದು ಖಚಿತಪಡಿಸಿಕೊಳ್ಳಿ.ಏರೋಸಾಲ್ ತಡೆಗೋಡೆ ಪೈಪೆಟ್ ಸುಳಿವುಗಳನ್ನು ಮಧ್ಯಮ ಬಲದೊಂದಿಗೆ ಬಾವಿಯ ಮಧ್ಯದಲ್ಲಿ ಇರಿಸಬೇಕು ಮತ್ತು ಮೊದಲ ಗೇರ್ ಅನ್ನು ತಲುಪಿದಾಗ (ಗುಳ್ಳೆಗಳನ್ನು ತಪ್ಪಿಸಲು) ಪೈಪ್ ಅನ್ನು ತಳ್ಳುವುದನ್ನು ನಿಲ್ಲಿಸಬೇಕು.ಬಾವಿಗಳು ತುಂಬಿದ ನಂತರ, ಎಲ್ಲಾ ಬಾವಿಗಳನ್ನು ಮುಚ್ಚಲು ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ಚಿಪ್ ಮೆಂಬರೇನ್ ಅನ್ನು ಹೊರತೆಗೆಯಿರಿ ಮತ್ತು ನಂತರ ಚಿಪ್ ಅನ್ನು ವರ್ಧನೆ ಪತ್ತೆ ಪ್ರದೇಶಕ್ಕೆ ವರ್ಗಾಯಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.
4. ಪಿಸಿಆರ್ ವರ್ಧನೆ (ಪತ್ತೆ ಪ್ರದೇಶ)
4.1 ಪಿಸಿಆರ್ ಟ್ಯೂಬ್ಗಳು/ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ಚಿಪ್ ಅನ್ನು ರಿಯಾಕ್ಷನ್ ಟ್ಯಾಂಕ್‌ಗೆ ಹಾಕಿ ಮತ್ತು ಪ್ರತಿ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯ ಹೆಸರನ್ನು ಅನುಗುಣವಾದ ಕ್ರಮದಲ್ಲಿ ಹೊಂದಿಸಿ.
4.2 ಪತ್ತೆ ಫ್ಲೋರೊಸೆನ್ಸ್‌ನ ಸೆಟ್ಟಿಂಗ್‌ಗಳು: (1) ಮಂಕಿಪಾಕ್ಸ್ ವೈರಸ್ (FAM);(2) ಆಂತರಿಕ ನಿಯಂತ್ರಣ (CY5).
4.3 ಕೆಳಗಿನ ಸೈಕ್ಲಿಂಗ್ ಪ್ರೋಟೋಕಾಲ್ ಅನ್ನು ರನ್ ಮಾಡಿ
ABI7500, Bio-Rad CFX96, SLAN-96S, QuantStudio ನ ಪ್ರೋಟೋಕಾಲ್:
| ಹಂತಗಳು | ತಾಪಮಾನ | ಸಮಯ | ಸೈಕಲ್‌ಗಳು | |
| 1 | ಪ್ರೀ-ಡಿನಾಟರೇಶನ್ | 95℃ | 2 ನಿಮಿಷಗಳು | 1 |
| 2 | ಡಿನಾಟರೇಶನ್ | 95℃ | 10 ಸೆ | 45 |
| ಅನೆಲಿಂಗ್, ವಿಸ್ತರಣೆ, ಫ್ಲೋರೊಸೆನ್ಸ್ ಸ್ವಾಧೀನ | 60℃ | 30 ಸೆ | ||
BTK-8 ನ ಪ್ರೋಟೋಕಾಲ್:
| ಹಂತಗಳು | ತಾಪಮಾನ | ಸಮಯ | ಸೈಕಲ್‌ಗಳು | |
| 1 | ಪ್ರೀ-ಡಿನಾಟರೇಶನ್ | 95℃ | 2 ನಿಮಿಷಗಳು | 1 |
| 2 | ಡಿನಾಟರೇಶನ್ | 95℃ | 5 ಸೆ | 45 |
| ಅನೆಲಿಂಗ್, ವಿಸ್ತರಣೆ, ಫ್ಲೋರೊಸೆನ್ಸ್ ಸ್ವಾಧೀನ | 60℃ | 14 ಸೆ | ||
5. ಫಲಿತಾಂಶಗಳ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆ (ದಯವಿಟ್ಟು ಉಪಕರಣ ಬಳಕೆದಾರರ ಕೈಪಿಡಿಯನ್ನು ನೋಡಿ)
ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯ ನಂತರ, ಫಲಿತಾಂಶಗಳನ್ನು ಸ್ವಯಂಚಾಲಿತವಾಗಿ ಉಳಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.ವಿಶ್ಲೇಷಿಸಲು "ವಿಶ್ಲೇಷಿಸು" ಕ್ಲಿಕ್ ಮಾಡಿ ಮತ್ತು ಸಾಧನವು ಫಲಿತಾಂಶದ ಅಂಕಣದಲ್ಲಿ ಪ್ರತಿ ಮಾದರಿಯ Ct ಮೌಲ್ಯಗಳನ್ನು ಸ್ವಯಂಚಾಲಿತವಾಗಿ ಅರ್ಥೈಸುತ್ತದೆ.ಋಣಾತ್ಮಕ ಮತ್ತು ಧನಾತ್ಮಕ ನಿಯಂತ್ರಣ ಫಲಿತಾಂಶಗಳು ಕೆಳಗಿನ "6. ಗುಣಮಟ್ಟ ನಿಯಂತ್ರಣ" ಗೆ ಅನುಗುಣವಾಗಿರಬೇಕು.
6. ಗುಣಮಟ್ಟ ನಿಯಂತ್ರಣ
6.1 ಋಣಾತ್ಮಕ ನಿಯಂತ್ರಣ: FAM ಚಾನಲ್‌ನಲ್ಲಿ Ct ಅಥವಾ Ct>40 ಇಲ್ಲ, ಸಾಮಾನ್ಯ ಆಂಪ್ಲಿಫಿಕೇಷನ್ ಕರ್ವ್‌ನೊಂದಿಗೆ CY5 ಚಾನಲ್‌ನಲ್ಲಿ Ct≤40.
6.2 ಧನಾತ್ಮಕ ನಿಯಂತ್ರಣ: ಸಾಮಾನ್ಯ ಆಂಪ್ಲಿಫಿಕೇಶನ್ ಕರ್ವ್‌ನೊಂದಿಗೆ FAM ಚಾನಲ್‌ನಲ್ಲಿ Ct≤35, ಸಾಮಾನ್ಯ ವರ್ಧನೆಯ ಕರ್ವ್‌ನೊಂದಿಗೆ CY5 ಚಾನಲ್‌ನಲ್ಲಿ Ct≤40.
6.3 ಮೇಲಿನ ಎಲ್ಲಾ ಮಾನದಂಡಗಳನ್ನು ಪೂರೈಸಿದರೆ ಫಲಿತಾಂಶವು ಮಾನ್ಯವಾಗಿರುತ್ತದೆ.ಇಲ್ಲದಿದ್ದರೆ, ಫಲಿತಾಂಶವು ಅಮಾನ್ಯವಾಗಿದೆ.
ಫಲಿತಾಂಶದ ವ್ಯಾಖ್ಯಾನ
ಕೆಳಗಿನ ಫಲಿತಾಂಶಗಳು ಸಾಧ್ಯ:
| FAM ಚಾನಲ್‌ನ Ct ಮೌಲ್ಯ | CY5 ಚಾನಲ್‌ನ Ct ಮೌಲ್ಯ | ವ್ಯಾಖ್ಯಾನ | |
| 1# | Ct ಅಥವಾ Ct>40 ಇಲ್ಲ | ≤40 | ಮಂಕಿಪಾಕ್ಸ್ ವೈರಸ್ ನೆಗೆಟಿವ್ |
| 2# | ≤40 | ಯಾವುದೇ ಫಲಿತಾಂಶಗಳು | ಮಂಕಿಪಾಕ್ಸ್ ವೈರಸ್ ಪಾಸಿಟಿವ್ |
| 3# | 40-45 | ≤40 | ಮರು ಪರೀಕ್ಷೆ;ಅದು ಇನ್ನೂ 40~45 ಆಗಿದ್ದರೆ, 1# ಎಂದು ವರದಿ ಮಾಡಿ |
| 4# | Ct ಅಥವಾ Ct>40 ಇಲ್ಲ | Ct ಅಥವಾ Ct>40 ಇಲ್ಲ | ಅಮಾನ್ಯವಾಗಿದೆ |
ಸೂಚನೆ: ಅಮಾನ್ಯ ಫಲಿತಾಂಶವು ಸಂಭವಿಸಿದಲ್ಲಿ, ಮಾದರಿಯನ್ನು ಸಂಗ್ರಹಿಸಿ ಮತ್ತೊಮ್ಮೆ ಪರೀಕ್ಷಿಸಬೇಕಾಗುತ್ತದೆ.
ಆರ್ಡರ್ ಮಾಹಿತಿ
| ಉತ್ಪನ್ನದ ಹೆಸರು | ಬೆಕ್ಕುಸಂ | ಗಾತ್ರ | ಮಾದರಿಯ | ಶೆಲ್ಫ್ ಜೀವನ | ಟ್ರಾನ್ಸ್& Sto.ತಾಪ |
| ಮಂಕಿಪಾಕ್ಸ್ ವೈರಸ್ ರಿಯಲ್ ಟೈಮ್ ಪಿಸಿಆರ್ ಕಿಟ್ | B001P-01 | 48 ಪರೀಕ್ಷೆಗಳು/ಕಿಟ್ | ಸೀರಮ್ / ಲೆಸಿಯಾನ್ ಎಕ್ಸೂಡೇಟ್ | 12 ತಿಂಗಳುಗಳು | -25～-15℃ |
